la presente invenzione riguarda la progettazione, la sintesi e la validazione funzionale di nuovi oligonucleotidi antisenso personalizzati che, riconoscendo e legandosi specificamente a sequenze di pre-mRNA coinvolte nello splicing, sono in grado di indurre specifiche reazioni di “exon skipping” nel gene distrofina. Nella presente invenzione la tecnologia antisenso è usata per indurre l’exon skipping di esoni “in frame” contenenti mutazioni puntiformi responsabili della distrofia muscolare di Duchenne. L’invenzione impiega oligoribonucleotidi 2’O-metilfosforotioati disegnati sia su sequenze mutate che normali relative a 5 diversi esoni in-frame (10, 16, 26,33, 34) di 5 diversi pazienti Duchenne. I sette oligonucleotidi personalizzati sono stati disegnati mediante l’uso del programma ESEFinder tenendo conto dei parametri relativi alle proteine SF2/ASF e SC35 e della distanza assoluta dal sito di giunzione in posizione 3’. L’efficienza di exon skipping dei sette oligonucleotidi è stata valutata mediante analisi in vitro su culture di cellule miogeniche derivate da tessuti dei pazienti ottenuti con consenso informato. I risultati ottenuti da questi esperimenti indicano che i 7 nuovi oligonucleotidi antisenso sono in grado di determinare in modo specifico la omissione esonica e di indurre un trascritto in frame di distrofina in tutte le cellule miogeniche consentendo il ripristino della sintesi di distrofina.
Oligonucleotidi antisenso atti ad indurre lo skipping esonico e loro impiego come medicamento per il trattamento della distrofia muscolare di Duchenne (DMD)
FERLINI, Alessandra
2009
Abstract
la presente invenzione riguarda la progettazione, la sintesi e la validazione funzionale di nuovi oligonucleotidi antisenso personalizzati che, riconoscendo e legandosi specificamente a sequenze di pre-mRNA coinvolte nello splicing, sono in grado di indurre specifiche reazioni di “exon skipping” nel gene distrofina. Nella presente invenzione la tecnologia antisenso è usata per indurre l’exon skipping di esoni “in frame” contenenti mutazioni puntiformi responsabili della distrofia muscolare di Duchenne. L’invenzione impiega oligoribonucleotidi 2’O-metilfosforotioati disegnati sia su sequenze mutate che normali relative a 5 diversi esoni in-frame (10, 16, 26,33, 34) di 5 diversi pazienti Duchenne. I sette oligonucleotidi personalizzati sono stati disegnati mediante l’uso del programma ESEFinder tenendo conto dei parametri relativi alle proteine SF2/ASF e SC35 e della distanza assoluta dal sito di giunzione in posizione 3’. L’efficienza di exon skipping dei sette oligonucleotidi è stata valutata mediante analisi in vitro su culture di cellule miogeniche derivate da tessuti dei pazienti ottenuti con consenso informato. I risultati ottenuti da questi esperimenti indicano che i 7 nuovi oligonucleotidi antisenso sono in grado di determinare in modo specifico la omissione esonica e di indurre un trascritto in frame di distrofina in tutte le cellule miogeniche consentendo il ripristino della sintesi di distrofina.I documenti in SFERA sono protetti da copyright e tutti i diritti sono riservati, salvo diversa indicazione.
