INTRODUZIONE: CBFA2T3-GLIS2 è un gene di fusione presente nel 15-25% delle AMKL. L’obiettivo di questo studio è stato quello di caratterizzare l’effetto di CBFA2T3-GLIS2 nel processo di differenziazione ematopoietica in un modello di iPSC e studiare l’effetto del GANT61, inibitore specifico di HH, in questo modello cellulare. METODI E RISULTATI: Le iPSC derivate da donatore sano sono state ingegnerizzate per esprimere CBFA2T3-GLIS2 sotto il controllo del promotore CD43, sfruttando il locus AAVS1 (Figura 1A). Tre colonie indipendenti di iPSC con corretta integrazione del trascritto sono state indotte a differenziare in progenitori ematopoietici e megacariociti, in cui è stata confermata l’espressione di CBFA2T3-GLIS2 e di alcuni suoi target specifici. L’analisi immunofenotipica del processo di differenziazione ematopoietica ha dimostrato che la presenza della fusione induce un aumento del numero di cellule CD43+, composte da una sottopopolazione anomala di megacariociti caratterizzata da bassi livelli di espressione dei marcatori CD41,CD42 e CD61, mai riscontrata nelle cellule di controllo (Figura 1B). Ulteriori studi hanno dimostrato che CBFA2T3-GLIS2 è sufficiente per incrementare la proliferazione cellulare (Figura 1C) e bloccare la differenzazione in megacariociti. Il trattamento dei progenitori ematopoietici derivati dalla differenzazione delle iPSC con GANT61 ha dimostrato che il farmaco già a basse concentrazioni inibisce in modo specifico l’attività proliferativa aberrante indotta da CBFA2T3-GLIS2 (Figura 1D). CONCLUSIONI: L’espressione di CBFA2T3-GLIS2 nelle iPSC riproduce le caratteristiche cellulari e molecolari delle AMKL incrementando l’espressione di geni target, inducendo la differenzazione anomala dei megacariociti e attivando la proliferazione cellulare. PROSPETTIVE FUTURE: Questo modello sarà utile per approfondire gli effetti biologici del GANT61 che ad oggi sono molto promettenti.

L’espressione di CBFA2T3-GLIS2 altera il processo di differenziazione ematopoietica nel modello di Induced Pluripotent Stem Cells (IPSC) di leucemia acuta megacarioblastica pediatrica

A. Astolfi;
2018

Abstract

INTRODUZIONE: CBFA2T3-GLIS2 è un gene di fusione presente nel 15-25% delle AMKL. L’obiettivo di questo studio è stato quello di caratterizzare l’effetto di CBFA2T3-GLIS2 nel processo di differenziazione ematopoietica in un modello di iPSC e studiare l’effetto del GANT61, inibitore specifico di HH, in questo modello cellulare. METODI E RISULTATI: Le iPSC derivate da donatore sano sono state ingegnerizzate per esprimere CBFA2T3-GLIS2 sotto il controllo del promotore CD43, sfruttando il locus AAVS1 (Figura 1A). Tre colonie indipendenti di iPSC con corretta integrazione del trascritto sono state indotte a differenziare in progenitori ematopoietici e megacariociti, in cui è stata confermata l’espressione di CBFA2T3-GLIS2 e di alcuni suoi target specifici. L’analisi immunofenotipica del processo di differenziazione ematopoietica ha dimostrato che la presenza della fusione induce un aumento del numero di cellule CD43+, composte da una sottopopolazione anomala di megacariociti caratterizzata da bassi livelli di espressione dei marcatori CD41,CD42 e CD61, mai riscontrata nelle cellule di controllo (Figura 1B). Ulteriori studi hanno dimostrato che CBFA2T3-GLIS2 è sufficiente per incrementare la proliferazione cellulare (Figura 1C) e bloccare la differenzazione in megacariociti. Il trattamento dei progenitori ematopoietici derivati dalla differenzazione delle iPSC con GANT61 ha dimostrato che il farmaco già a basse concentrazioni inibisce in modo specifico l’attività proliferativa aberrante indotta da CBFA2T3-GLIS2 (Figura 1D). CONCLUSIONI: L’espressione di CBFA2T3-GLIS2 nelle iPSC riproduce le caratteristiche cellulari e molecolari delle AMKL incrementando l’espressione di geni target, inducendo la differenzazione anomala dei megacariociti e attivando la proliferazione cellulare. PROSPETTIVE FUTURE: Questo modello sarà utile per approfondire gli effetti biologici del GANT61 che ad oggi sono molto promettenti.
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